响应面法优化基因工程菌产木聚糖酶的条件
响应面法优化基因工程菌产木聚糖酶的条件(任务书,开题报告,外文翻译,论文10000字)
摘 要
木聚糖酶是一种重要的木糖苷键水解酶，对水解植物纤维原料中的半纤维素
有着重要作用。木聚糖酶用途广阔，目前已在造纸、食品和饲料等工业中得到了广泛的应用。
本论文以实验室已有的基因工程菌Rosetta(DE3)/pET28a(+)-xynB64(Δ4-60)- His.Tag,为出发菌株，在单因素实验的基础上，利用Plackett-Burman实验设计对诱导相条件中的7个因素（IPTG浓度、酵母粉含量、胰蛋白胨含量、诱导时机、诱导温度、摇床转速、诱导时长）进行评价，方差分析结果表明，诱导温度、诱导时机和摇床转速为影响酶表达的主要因素。在此基础上，采用响应面法进一步优化了这三个因素，当诱导时机为6.40 h、摇床转速为204.28 rpm和诱导温度为41.27 ℃时，预测酶活为100.967 U/mL，实验验证酶活为106.7 U/mL，稍高于理论值。而改造前的工程菌在其最佳条件下产酶量少于50 U/mL。
关键词：耐热木聚糖酶 产酶条件优化
ABSTRACT
Xylanase is an important enzyme of glyco-hydrolases, which can hydrolyze the hemicelluloses of plant wall.It is widely used in paper Industry, food and animal feed industries.
The recombinant engineering bacteria Rosetta(DE3)/pET28a(+)-xynB64(Δ4-60)- His.Tag was used as the original strain. On the basis of single factor experiment, significant factors were analysed from 7 elements including IPTG concentration, yeast, tryptone, induction time, induction temperature, shaking speed and duration of induction using Plackett-Burman experiment design. Analysis of variance indicated that the notable factors were temperature, induction time and duration of induction. Furthermore, these factors were optimized by response surface methodology, and the optimum activity predicted was 100.967 U/mL, when the induction time was 6.40 h, shaking speed was 204.28 rpm and expression temperature was 41.27℃. The result of validation test was 106.7 U/mL, slightly higher than the prediction. Moreover, the production of XynB is less than 50 U/mL under the best fermentation conditions.
KEYWORDS：Thermostable xylanase；Optimization of enzyme production
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目录
摘 要 I
ABSTRACT II
目录 1
第一章 文献综述 1
1.1 引言 1
1.2 木聚糖 1
1.3 木聚糖酶 2
1.3.1 木聚糖酶的来源 2
1.3.2 木聚糖酶的性质 3
1.3.3 木聚糖酶的分类 3
1.4 耐热木聚糖酶 4
1.4.1 耐热木聚糖酶的性质 5 [资料来源：Doc163.com]
1.4.2 耐热木聚糖酶的耐热机理 6
1.4.3 耐热木聚糖酶的应用 7
第二章 耐热木聚糖酶产酶条件的优化 10
2.1 引言 10
2.2 实验材料 10
2.2.1 菌种 10
2.2.2 培养基 10
2.2.3 主要仪器设备 10
2.2.4 主要试剂及原料 11
2.3 实验方法 11
2.3.1 种子液制备 11
2.3.2 基因工程菌在TB培养基中的生长曲线 11
2.3.3 单因素条件优化实验 11
2.3.4 Plackett-Burman实验 12
2.3.5 响应面实验 12
2.3.6 优化前后全细胞电泳图 12
2.4 实验结果与讨论 13
2.4.1 基因工程菌在TB培养基中的生长曲线 13
2.4.2 单因素条件优化 13
2.4.3 Plackett-Burman实验 17
2.4.4 响应面实验 20
2.4.5 优化前后全细胞电泳图 22
第三章 结论与展望 24
3.1 结论 24
3.2 展望 24
参考文献 25
致 谢 26
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