酸性蛋白酶产生菌的筛选及发酵条件的优化
资料介绍：
酸性蛋白酶产生菌的筛选及发酵条件的优化(毕业论文10000字)
摘 要：以酪素为唯一氮源，从浏阳河畔土样筛选出一株酸性蛋白酶产生菌Lin-10，该菌经革兰氏染色鉴定为革兰氏阴性菌，通过单一因子实验对该菌株进行发酵条件的优化，得出最适碳源为2%玉米粉、最适氮源为0.6%硫酸铵，在初始pH 6.0、发酵温度32 ℃的条件下发酵培养2 d，酶活能达778.53 IU/ml，通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳初步测得该酶的分子量为28kDa。
关键词：酸性蛋白酶；革兰氏阴性菌；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳；
[来源：http://Doc163.com]
Screening A Strain Of acid Protease And Optimizing Fermentation Conditions
Abstract：A acid protease producing strain Lin-10 was screened by casein medium(casein as unique nitrogen source) from soil near Liu Yang River. Lin-10 was identified as gram-negative bacterium. Fermentation conditions for secreting protease were optimized by single factor experiment. The results showed the protease activity reached 778.53 IU/mL when Lin-10 was cultured under conditions：carbon source 2% corn flour, nitrogen source 0.6% ammonium sulfate, initial pH of medium 6.0, culture temperature 32℃, fermentation period 2 days. The molecular weight of protease from strain Lin-10 was 28 kDa estimated by method SDS-PAGE.
Key words：acid protease; gram-negative bacterium; SDS - polyacrylamide gel electrophoresis;
目 录
摘要……………………………………………………………………………1
关键词…………………………………………………………………………1
1 前言……………………………………………………………………………1
1.1 酸性蛋白酶国内外研究进展…………………………………………………2
1.2 酸性蛋白酶的生产及条件优化………………………………………………2
1.3 酸性蛋白酶的应用前景…………………………………………………………3
2实验材料与方法………………………………………………………………………3
2.1实验材料………………………………………………………………………3
2.2主要药品与试剂………………………………………………………………3
2.2.1 药品………………………………………………………………………3
2.2.2 试剂………………………………………………………………………4
2.3主要仪器………………………………………………………………………4
2.4酸性蛋白酶产生菌的筛选……………………………………………………5
2.3.1 采集样品及土壤样品的富集培养…………………………………5
2.3.2 初筛…………………………………………………………………5
2.3.3 复筛………………………………………………………………………6
2.3.4 菌种的鉴定………………………………………………………………6
2.4 酸性蛋白酶产生菌发酵条件的优化…………………………………………6
2.4.1 酶活力定义………………………………………………………………6
2.4.2 标准曲线的制作…………………………………………………………6
2.4.3 酸性蛋白酶酶活力的测定 ………………………………………………7
2.4.3 单因子实验………………………………………………………………7
2.5 SDS-PAGE法测定酸性蛋白酶相对分子质量………………………………8
2.5.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 …………………………………………8
2.5.2 凝胶的制备 ………………………………………………………………8
2.5.3 电极缓冲液的选择 ………………………………………………………9
2.5.4 电泳 ………………………………………………………………………9
2.5.5 染色于固定 ………………………………………………………………9
2.5.6 脱色 ………………………………………………………………………9
3 结果与分析………………………………………………………………………9
3.1 酸性蛋白酶产生菌的筛选 ……………………………………………………9
3.1.1 初筛 ………………………………………………………………………9
3.1.2 形态学研究………………………………………………………………10
3.2 单一因子实验研究……………………………………………………………10
3.2.1 酸性蛋白酶产生菌发酵周期的测定……………………………………10
3.2.2 最适氮源、碳源的筛选 …………………………………………………11
3.2.3 温度对酸性蛋白酶产生菌发酵的影响…………………………………12
3.2.4 初始PH对酸性蛋白酶产生菌发酵的影响………………………………13
3.3 SDS-PAGE电泳研究……………………………………………………13
4实验结论……………………………………………………………………………14
参考文献 ………………………………………………………………………14
致谢……………………………………………………………………………14