木糖酸脱水酶的定向改造的研究
木糖酸脱水酶的定向改造的研究(论文10000字)
摘 要
木糖酸脱水酶参与了很多代谢途径，也是很多生物合成途径中的重要酶。研究发现，木糖酸脱水酶有不同的菌株来源，不同菌种的脱水酶性质可能有较大的差别。木糖酸脱水酶对微生物发酵生产化学品的产量和质量等指标有重要影响，所以了解它的相应的性质可以提高生物转化的效率。
本文建立木糖酸脱水酶的高通量筛选方法，构建了1000-2000的突变库，通过充分对比之后从中选择了91号与96号，这两种相比于其他菌株突变效果更为显著，通过催化反应12h后，91号菌株和96号菌株的木糖酸的消耗量分别为4.2 g/L、4.8 g/L，且分别是未突变菌株的2.1和2.4倍。
关键词：木糖酸脱水酶 易错PCR 高通量筛选
Study on the Directional Modification of Xylose Dehydratase
Abstract
Xylose dehydratase is involved in many metabolic pathways and is an important enzyme in many biosynthetic pathways. The study found that xylose dehydratase can be obtained from many kinds of strains, and the difference in strain types directly determines the difference in their properties. Xylose dehydratase has an important influence on the yield and quality of microbial fermentation production chemicals, so understanding its corresponding properties can accelerate the efficiency of biotransformation.
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In this paper, a high-throughput screening method for xylose dehydratase was established, and a 1000-2000 mutant library was constructed. After sufficient comparison, 91 and 96 were selected, and the two mutants were more effective than other strains, and were placed in 33℃. After 12 h of transformation, the consumption of xylenic acid of strains 91 and 96 was 4.2 g/L and 4.8 g/L, respectively, and was 2.1 and 2.4 times, respectively, of the unmutated strain.
Key Words: xylose dehydratase；Error-prone PCR ；High-throughput screening
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目录
摘 要 I
Abstract II
第一章 文献综述 1
1.1 木糖酸脱水酶 1
1.1.1 木糖酸脱水酶简介 1
1.1.2 木糖酸脱水酶的应用 1
1.2 木糖酸 2
1.2.1 木糖酸介绍 2
1.2.2 木糖酸的应用 2
1.3 定向进化 3
1.3.1 定向进化的研究进展 3
1.3.2 定向进化的策略 4
1.4 本课题研究的意义与主要内容 5
1.4.1 本课题研究的意义 5
1.4.2 本课题研究的主要内容 5
第二章 材料与方法 7
2.1 实验材料与设备 7
2.1.1 主要材料与试剂 7
2.1.2 实验设备 8
2.2 实验方法 8
2.2.1 易错PCR 8
2.2.2 连接转化 9
2.2.3 提质粒 10
2.2.4 纯化方法 10
2.2.5 胶回收 11
2.3 培养方法 11
2.3.1 平板培养 11
2.3.2 种子液培养 11
2.3.3 摇瓶发酵培养 11
2.4 分析方法 11
第三章 结果与讨论 13
3.1 木糖酸脱水酶突变库的构建 13
3.1.1 重组质粒pCWJ-YjhG的构建 13
3.1.2 含YjhG基因突变库的构建..............................................................................14
3.2 初筛及复筛结果 14
3.3 突变位点分析 15
3.4 突变酶发酵时木糖酸消耗量的对比 16
第四章 结论与展望 18
4.1 结论 18
4.2 展望 18
参考文献 19
致谢 21 [来源：http://www.doc163.com]