农杆菌介导籼稻转化研究

摘 要：通过农杆菌介导法，将BWIP4基因转到三个籼稻品种（R996、湘晚籼11 号,湘晚籼13 号）的愈伤组织中，经过潮霉素筛选后，获得了一批抗性苗。通过PCR检测和GUS组织化学染色分析，发现BWIP4基因已整合到水稻基因组，旨在建立一套较为有效的籼稻转化体系。

关键词：水稻; BWIP4基因; 农杆菌介导法; 基因转化

 

Research of transformation mediated by Agrobacterium in indica rice

Abstract：The gene BWIP4 was successfully introduced into the calli of three indica rice cultivars (R996, Xiangwanxian 11, Xiangwanxian 13) based on the Agrobacterium-mediated method.Many transgenic lines were obtained through the hygromycin screening.Transgenic plants were verified by GUS and PCR,Therefore BWIP4 gene has integrated into the rice genome. An efficient indica rice transformation system was established.

Key words：Rice; BWIP4 gene; Agrobacterium-mediated method ; 

目  录  

摘要 1

关键词 1

1 前言 1

1.1 农杆菌介导法 2

1.2 农杆菌及其介导水稻遗传转化的原理   3

1.3 实验目的 4

2 材料与方法 4

2. 1 材料 4

     2.1 .1植物材料 5

     2.1. 2 药品和仪器 5

     2.1. 3 培养基 5

     2.1. 4 农杆菌菌株及质粒 6

2. 2 方法 6

     2.2. 1载体及工程菌 6

     2.2. 2 转化体系 6

     2.2. 3 GUS活性测定 8

     2.2. 4 潮霉素筛选 8

     2.2. 5 水稻总DNA的提取 8

 2.2. 6 转基因植株PCR检测 8

3 结果分析 9

3.1 转化体系 9

3.2 不同受体品种的愈伤诱导率 10

3.3 不同品种的愈伤继代情况 11

3.4 不同品种的转化率 12

3.5 转基因苗的测定 13

    3.5. 1 GUS测定 13

   3.5.2 转基因植株的PCR测定 14

4 讨论与分析 14

4.1 农杆菌介导水稻转化的影响因素 14

    4.1.1 基因型 14

    4.1.2 菌株和载体 15

    4.1.3 转化受体 15

    4.1.4 共培养时间 15

    4.1.5 酚类等化合物的加入 15

    4.1.6 预分化对籼稻转化的影响 15

    4.1.7 潮霉素在转化中的作用 16

4.2  农杆菌转化单子叶植物取得成功的原因 16

4.3农杆菌介导水稻存在的问题 16

参考文献 17

致  谢 19